祝賀復旦大學老師訂購我司：細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒，上海信帆供應細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒，產品質量穩定，*，歡迎聯系！

      在研究細胞時經常要研究細胞的不同組份，而研究得多的兩個細胞組份就是細胞核和細胞漿。分離細胞核蛋白和細胞漿蛋白，不僅可以用于研究蛋白在細胞內的定位，而且很多時候分離出來的核蛋白可以用于轉錄調控方面的研究，例如EMSA(也稱gel shift)，footprinting等。
      細胞核蛋白與細胞漿蛋白抽提試劑盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一種比較簡單、方便的從培養細胞或新鮮組織中抽提細胞核蛋白與細胞漿蛋白的方法。約90分鐘就可以完成培養細胞的細胞核蛋白與細胞漿蛋白的分離。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，報告基因檢測以及酶活力測定等后續操作。
      本試劑盒是通過細胞漿蛋白抽提試劑A和B，在低滲透壓條件下，使細胞充分膨脹，然后破壞細胞膜，釋放出細胞漿蛋白，然后通過離心得到細胞核沉淀。后通過高鹽的細胞核蛋白抽提試劑抽提得到細胞核蛋白。
     對于細胞樣品，如果每個樣品的數量不超過二百萬個細胞，本試劑盒可以抽提50個樣品；對于組織樣品，如果每個樣品的重量不超過30毫克，本試劑盒可以抽提50個樣品，如果每個樣品約為30-60毫克，本試劑盒可以抽提37個樣品。
包裝清單：

保存條件：
      -20℃保存，一年有效。

使用說明：
1. 準備溶液：室溫融解試劑盒中的三種試劑，溶解后立即放置在冰上，混勻。取適當量的細胞漿蛋白抽提試劑A備用，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。取適當量的細胞核蛋白抽提試劑備用，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1mM。
2. 對于貼壁細胞：用PBS洗一遍，用細胞刮子刮下細胞，或用EDTA溶液處理細胞使細胞不再貼壁很緊，并用移液器吹打下細胞。離心收集細胞，盡大努力吸盡上清，留下細胞沉淀備用。盡量避免用胰酶消化細胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 對于懸浮細胞：用PBS洗一遍，離心收集細胞，盡大努力吸盡上清，留下細胞沉淀備用。
4. 每20微升細胞沉淀加入200微升添加了PMSF的細胞漿蛋白抽提試劑A。(對于二百萬HeLa細胞，其細胞沉淀的體積大約為20微升或40毫克。)
5. 高速劇烈Vortex 5秒，把細胞沉淀*懸浮并分散開。(如果細胞沉淀沒有*懸浮并分散開，可以適當延長vortex時間。)
6. 冰浴10-15分鐘。
7. 加入細胞漿蛋白抽提試劑B 10微升。高速劇烈Vortex 5秒，冰浴1分鐘。
8. 高速劇烈Vortex 5秒，4℃ 12,000-16,000g離心5分鐘。
9. 立即吸取上清至一預冷的塑料管中，即為抽提得到的細胞漿蛋白。可以立即使用，也可以凍存。(千萬不要觸及沉淀，可以在沉淀上方保留極小體積的上清，以免觸及沉淀。每200萬細胞用200微升本產品中的細胞漿蛋白抽提試劑A裂解后可獲得的上清，其細胞漿蛋白濃度約為2-5mg/ml，不同細胞有所不同。)
10. 對于沉淀，*吸盡殘余的上清，加入50微升添加了PMSF的細胞核蛋白抽提試劑。(不吸盡上清會帶來細胞漿蛋白的污染。)
11. 高速劇烈Vortex 15-30秒，把細胞沉淀*懸浮并分散開。然后放回冰浴中，每隔1-2分鐘再高速劇烈Vortex 15-30秒，共30分鐘。
12. 4℃ 12,000-16,000g離心10分鐘。
13. 立即吸取上清至一預冷的塑料管中，即為抽提得到的細胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃凍存。每200萬細胞用50微升本產品中的細胞核蛋白抽提試劑裂解后獲得的上清，其細胞核蛋白濃度約為1.2-3.0mg/ml，不同細胞有所不同。
14. 對于新鮮組織：
a. 把組織盡可能切成非常細小的碎片。按照20:1的比例混合適當量的細胞漿蛋白抽提試劑A和B(例如200微升細胞漿蛋白抽提試劑A中加入10微升抽提試劑B)。并加入PMSF至終濃度為1mM配制成組織勻漿液。按照每60mg組織加入200微升組織勻漿液的比例混合組織和組織勻漿液(對于不超過30mg的組織樣品，僅需加入100微升組織勻漿液)，并在玻璃勻漿器內充分勻漿。勻漿需在冰浴或4℃進行。
b. 勻漿后把勻漿液轉移到塑料離心管內，冰浴放置15分鐘。
c. 4℃ 1,500g離心5分鐘。把上清轉移至一預冷的塑料管中，為抽提得到的部分細胞漿蛋白。(吸上清時千萬不要觸及沉淀。)
d. 對于沉淀，到了這一步已經充分勻漿，但很多細胞還沒有破碎。接下去按照使用說明的步驟4開始操作，即把沉淀當做已經離心收集好的細胞沉淀操作，按照步驟4至步驟13抽提得到細胞漿蛋白和細胞核蛋白(特別說明：對于起始量為30-60mg的組織樣品，后續直接按照步驟4-13操作即可；對于起始量不超過30mg的組織樣品，后續步驟4-13中的溶液的用量須減半使用)。抽提得到的細胞漿蛋白可以和步驟14c中抽提得到的細胞漿蛋白合并。新鮮的肝臟組織用本產品裂解后獲得的上清，其細胞漿蛋白濃度約為3-10mg/ml，細胞核蛋白濃度約為3-10mg/ml，不同狀態的不同組織有所不同。