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環氧-瓊脂糖凝膠FF的使用方法您知道嗎?

更新時間:2022-12-20      瀏覽次數:503

環氧-瓊脂糖凝膠FF的使用方法您知道嗎?


環氧-瓊脂糖凝膠FF是一種將環氧基團鍵合在瓊脂糖微球上形成的活化層析分離介質中間體。該產品保留了瓊脂糖的親水性及大網架結構,與生物活性大分子有很好的相容性,具有高活化基團密度,適用于帶適用于氨基、羥基、巰基等基團的配基的偶聯,偶聯效率高。


技術指標:

外觀

乳白色半透明凝膠狀凝膠

基質

4%瓊脂糖凝膠

配體

環氧

配體密度

≥15 μmol/mL

蛋白質偶聯量

≥10 mg/ml IgG

最大流速

300 cm/h

耐反壓

0.3 MPa

推薦流速

50 ~ 100 cm/h

粒徑范圍

60 ~ 180μm

工作溫度

4 ~ 40℃

基質pH穩定性

3 ~ 12(長時間);2 ~ 14(短時間)

基質化學穩定性

在以下溶液中穩定:常用的水相緩沖液;1 mol/L NaOH1 mol/L乙酸(pH 4.0);6 mol/L鹽酸胍;70%乙醇。


使用方法:

   1. 在配基偶聯前,準備好所有的樣品、溶液、緩沖液等,盡量減少每一步操作之間的間隙。

  2. 偶聯前用蒸餾水洗滌10個體積以上,去除保存液。

  3. 根據目標配基選擇偶聯溶液體系,一般情況下巰基偶聯pH為7 ~ 9,氨基偶聯pH為9 ~ 11,羥基偶聯pH為>11。

  4. 可以在20 ~ 40℃下偶聯,一般提高溫度能加速偶聯,在偶聯效果不好的情況下,可以提高溫度至35℃以上,但要考慮配基的穩定性。

  5. 偶聯時間依據反應速度而定,通常可偶聯過夜(16 h)。

  6. 偶聯配基后,剩余環氧基團需要封閉,可用半胱氨酸、乙醇胺、甘氨酸等小分子試劑封閉數小時,如0.2 M Na2CO3, 0.1 M 乙醇胺, pH 10,37℃封閉16 h。

  7. 偶聯完畢,用pH 8 ~ 9、0.1 mol/LTris-HCl緩沖液和pH 4 ~ 5、0.1 M醋酸-醋酸鈉緩沖液依次沖洗,循環三遍,去除未偶聯的殘留配基。

  8. 偶聯后的凝膠可保存在含抑菌劑的溶液中,如20%乙醇。

環氧-瓊脂糖凝膠FF的使用方法您知道嗎?

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