信帆生物新品上市：神經(jīng)肽Y 放免試劑盒供應(yīng)！

神經(jīng)肽Y 放免藥盒操作說明書
NPY RIA KIT
神經(jīng)肽Y(Neuropetide NPY)是一種含有36 個(gè)氨基酸殘基的多肽。廣泛分布于哺乳動(dòng)物的中
樞神經(jīng)系統(tǒng)。NPY 可收縮血管，升高血壓，對(duì)心臟表現(xiàn)為負(fù)性肌力作用。zui近有作者證實(shí)血小
板有合成NPY 的能力。NPY 含量與應(yīng)激反應(yīng)程度有關(guān)，當(dāng)出血性休克時(shí)，NPY 釋放增加對(duì)維
持全身血壓穩(wěn)定和調(diào)節(jié)器官血流量具有重要的代償作用。研究各種病理狀態(tài)血漿及血小板NPY
含量與釋放的改變及其病理生理意義，對(duì)心腦血管疾病的防治具有廣闊的研究前景。
測(cè)定盒組成：
1、緩沖液一瓶。
2、分離劑（第二抗體）一瓶。
3、NPY 抗體一瓶，用前加ml 緩沖液稀釋。
4、NPY 標(biāo)記一瓶，用前加ml 緩沖液稀釋。
5、NPY 標(biāo)準(zhǔn)品五瓶：用前每瓶加ml 緩沖液稀釋33、100、300、600、1200pg/ml。
6、抑肽酶一瓶。
7、10%EDTA.Na2 一瓶。
樣品收集：
1、取靜脈血3ml 注入含10%EDTA.Na2 40ul 和抑肽酶10ul（含100U/ml 以上）的試管中，
混勻4℃，3000 轉(zhuǎn)/分離心10 分鐘，分離血漿（溶血樣品影響測(cè)定結(jié)果）。如需要可分裝2-3
份保存，放-20℃可保存2 個(gè)月，在-70℃以下可存放半年。測(cè)定前，使樣本置于室溫或冷水中
復(fù)融，再次4℃，3000 轉(zhuǎn)/分離心5 分鐘，取上清測(cè)定。
2、組織樣品的處理：取出活組織，吸去血跡，稱重，放入0.2mol/L 1N HAC 1ml 中，然后
在100℃水浴中煮沸10 分鐘，勻漿。4℃，3000 轉(zhuǎn)/分離心15 分鐘，取上清放-20℃以下保存，
測(cè)定時(shí)用PBS 五倍以上稀釋，以調(diào)節(jié)PH 值。另外，每種組織的樣品非特異結(jié)合（U0）可能有
差異，每份標(biāo)本zui單獨(dú)做一個(gè)U0。取組織的重量視不同組織而異。
3、血漿樣品處理：實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：有少數(shù)患者可能由于使用某些藥物或個(gè)體差異，出現(xiàn)血漿
蛋白對(duì)抗原抗體反應(yīng)的影響，測(cè)定NPY 值偏低，甚至為零。為排除樣品中蛋白質(zhì)的干擾，可采
用簡(jiǎn)易酸性乙醇提取法，
具體步驟如下：
取血漿0.5ml+1ml 酸性無水乙醇（ 100ml 無水乙醇+冰乙酸1.2ml），放振蕩器上振蕩1min，4℃，
3500rpm/15min 離心15min，將上清液倒入青霉素瓶，在45℃水浴鍋上蒸干（可將水浴鍋溫
度調(diào)到80℃左右，鍋口上放一鋁板，鋁板上溫度約40~45℃，將青霉素瓶置于鋁板之上），大
約需24 小時(shí)樣品可以*干燥，干燥后將青霉素瓶加蓋，封口，放-20℃保存。
測(cè)定前，每瓶加PH7.4 PBS 0.5ml 溶解，混勻，倒入塑料管中，放-20℃ 4h 以上至樣品*
凍結(jié)，然后取出放置4℃*溶解，取上清200ul 測(cè)定用。
注：從4℃取出后，一定要輕拿輕放，千萬不要再振蕩混勻，不要在室溫放置過久，現(xiàn)加現(xiàn)
取。
測(cè)定方法：本實(shí)驗(yàn)采用非平衡法，取聚苯乙烯編號(hào)，按下表操作。
NPY RIA 操作程序（單位：ul）
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試劑T NSB S0 S1~S5 樣品
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緩沖液—— 300 200 —— ——
標(biāo)準(zhǔn)品—— —— —— 200 ——
樣品—— —— —— —— 200
抗體—— —— 100 100 100
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搖勻，4℃ 48 小時(shí)
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125I-NPY 100 100 100 100 100
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搖勻，4℃ 24 小時(shí)
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分離劑—— 500 500 500 500
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混勻，室溫放置20 分鐘，4℃3500 轉(zhuǎn)/分離心25 分鐘，去上清，測(cè)定沉淀cpm 值。
結(jié)果計(jì)算：
以N/T、B/T 計(jì)算NSB、S0 結(jié)合百分率，以B/B0 計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)及待測(cè)物結(jié)合百分率，
在半對(duì)數(shù)座標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并查出樣品值或由自動(dòng)Υ-計(jì)數(shù)儀器直接讀出結(jié)果。
注：測(cè)兔標(biāo)本時(shí)，應(yīng)改用20%PEG500ul/管分離。同時(shí)向NSB、S0、S1~S5 管
加Υ球蛋白液100ul/管；U、U0 管加緩沖液100ul/管。
本試劑盒主要技術(shù)參數(shù)：
特異性：抗血清與7 種常見的多肽類化合物的交叉反應(yīng)<1%。
靈敏度：<33pg/ml。可測(cè)范圍：33~1200 pg/ml。
精密度：批內(nèi)CVW<10%，批間CVb<15% 。
有效期：本藥盒4~8℃，保存有效期35 天。
正常參考值：145.1±44.1 pg/ml。