明膠酶譜法試劑盒實驗步驟解析
明膠酶譜法，首先是將樣品進行電泳分離，然后在有二價金屬離子存在的緩沖系統中，將樣品中的MMP-2和MMP-9復性，在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠，zui后用考馬斯亮藍將凝膠染色，再脫色，在藍色背景下可出現白色條帶，條帶的強弱與MMP-2和MMP-9活性成正比。
明膠酶譜法試劑盒實驗步驟：
1.取對數生長期的癌細胞在的無血清培養基DMEM中培養24小時。
2.次日收集上清液，將上清液移入離心管中2000rpm離心10min，-70℃儲存備用。
3.根據細胞計數調整各組細胞上清液中的蛋白濃度。與5×上樣緩沖液混合，16ul樣本+4ul上樣緩沖液。
4.配制分離膠和濃縮膠，20ul/孔上樣，4℃進行SDS-PAGE電泳100v約1.5小時。
5.電泳結束后,將凝膠置于洗脫液中振蕩洗脫2次,每次30分鐘,然后用漂洗液漂洗2次,每次20分鐘,接著,將凝膠置于孵育液中37℃孵育42h。
6.孵育結束后經染色液染色3h,及脫色液A、B、C(甲醇濃度分別為30%、20%、10%,乙酸濃度分別為10%、10%、5%)分別脫色0.5、1、2h后，顯示出MMP-2（72KD）和MMP-9（92 KD）為位于藍色背景上的透亮帶，用凝膠圖像分析系統分析讀取條帶面積，寬度和灰度值，做統計分析。
明膠酶譜法試劑盒注意事項：
1、明膠酶譜的活性受鈣離子，鋅離子，和PH值等因素的影響，因此緩沖液配制應嚴格準確，盡量用超純水，孵育溫度也掌握好。
2、孵育液的PH在7.5-7.6，復性的TRITON時間長了會有絮狀物，所以實驗時盡量使用新鮮配置的。
更新時間：2017-06-21 
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